Takara RR820A對(duì)應(yīng)的產(chǎn)品名稱為：TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus)，是采用 TB Green 嵌合熒光法進(jìn)行 Real Time PCR 的專用試劑。Takara RR820A是一種高特異性qPCR試劑，讓我們一起來(lái)看看它的原理吧！

Takara RR820A使用了改良后的 TaKaRa Ex Taq HS 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)液中 TB Green 的熒光強(qiáng)度，達(dá)到監(jiān)控 PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。

1． PCR

PCR 法是以微量 DNA 進(jìn)行目的片段擴(kuò)增的方法。通過(guò) DNA 鏈的熱變性、引物退火、DNA 聚合酶作用下引物的延伸三個(gè)步驟循環(huán)往復(fù)，可在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增 DNA 達(dá)100萬(wàn)倍以上。本產(chǎn)品中的 DNA 聚合酶由于使用了 TaKaRa Ex Taq HS，從而抑制在調(diào)制反應(yīng)液等低溫條件下由引物產(chǎn)生的非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增，大大提高 PCR 擴(kuò)增靈敏度。

2． 嵌合熒光檢測(cè)法

TB Green 與雙鏈 DNA 結(jié)合后發(fā)出熒光，所以可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的 TB Green 熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè) PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。具體原理見(jiàn)下圖。通過(guò) PCR 反應(yīng)生成雙鏈 DNA，TB Green 與雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)出熒光，通過(guò)檢測(cè) PCR 反應(yīng)液中的熒光信號(hào)強(qiáng)度，可以對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量，同時(shí)還可以測(cè)定擴(kuò)增的目的 DNA 片 段的融解溫度。

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